Alkalische Phosphatase[1]                  14.04.2002

Puffer (pH 10.3)

4.457g   2-Amino-2-methyl-1-propanol (0.5M)

0.0407g  Magnesiumchlorid Hexahydrate (2mM)

 

ad 100 ml Aqua a.i., pH 10.3 mit 0.1M bzw 1M HCl

 

kurz vor der Messung bei 405 nm Zugabe von

0.3711g  4-Nitrophenyl Phosphat (10mM)

 

Messansatz für Mikrotiterplatten

200 ml    4-NPP-Puffer pH 10.3

50 ml     Enzym-Standard (1500 U in 103 ml)

 

messen bei 405 nm gegen den Leerwert

Anmerkungen

• 4-NPP ist bei 2-8°C dunkel zu lagern und aufgrund dessen erst kurz vor der Messung einzuwiegen
• Triton X-100 zeigte bei einer Konzentration von 1% im Testversuch keinen Einfluß auf die Werte der Eichkurve und kann deshalb zur Lyse der Zellen ungehindert eingesetzt werden
• Im Konzentrationsbereich von 1 bis 0.0156 U/ml ergaben die Eichwerte eine lineare Funktion